一九七四年二月二十三日，祖峰在江苏省南京市出生。他的中学时代是在当地知名的南京市金陵中学度过的。自一九九一年开始，祖峰进入南京汽车制造厂，在那里度过了四年的工作时光。一九九六年，他考入北京电影学院表演系，开始了为期四年的本科学习，在校期间还曾担任班级的团支书职务。从二零零零年毕业到二零零六年，祖峰选择留在母校任教，负责教授表演和台词课程，日后成名的演员如马苏、姚笛等都曾是他的学生。二零零六年，祖峰进一步深造，考取了北京电影学院首届（即零六级）MFA表演专业硕士研究生，继续提升自己的专业素养。此外，我们也能从一些公开的影像资料中看到他早年的照片风貌。
一九九九年，祖峰首次登上大银幕，在电影《鲁镇传说》中饰演了嚣张跋扈、痞气十足的富家恶少丁家昌，由此开启了他的演艺生涯。二零零一年，他迎来了创作上的一个小高峰，不仅主演了电视电影《十面埋伏》，并在其中一人分饰两角，生动演绎了明朝著名琵琶演奏家汤应曾以及角色阿桂，展现出其驾驭不同人物的能力；同年，他还在电视剧《高原骑兵连》中担任主演，塑造了坚毅果敢的骑兵军官徐立平这一形象。到了二零零三年，祖峰在电视剧《沉默的证人》中挑战了更为复杂的角色，饰演一位患有精神分裂症的病人石隐，其细腻的表演获得了关注。二零零五年，他继续活跃于电视荧屏，先后参演了电视剧《温暖》和《沙家浜》，进一步积累了表演经验。二零零六年，祖峰的舞台才华得以展现，他主演了话剧《我爱爱情》，并担纲男主角小P；此外，他还首次尝试幕后工作，与导演刘涓共同执导了数字电影《和顺的夏天》和《掌声响亮》，拓展了其在影视创作领域的边界。
二零零七年，祖峰首次登上话剧舞台，在作品《北京大爷》中饰演了欧日华一角，由此开启了他演艺生涯的新篇章。次年，他涉足大银幕，在电影《轮椅上的奇迹》中挑战自我，饰演了一位身患绝症却内心坚韧的击剑教练许烽。同年，他在电视剧《潜伏》中塑造了锋芒毕露的军统特务李涯，这一角色因其执着坚定的复杂性格而深入人心，并凭借此出色演绎荣获二零一零年华鼎奖最佳男配角奖。同年八月，他再度转变形象，于电视剧《密战》中化身为冷酷的国际商业间谍兼杀手蝴蝶，展现了其角色塑造的多样性。 二零零九年，祖峰担纲主演电影《宝贵的秘密》，诠释了山村青年照相师蓝宝贵的淳朴与梦想。同年七月，他在电视剧《隐形将军》中出演玩世不恭的富家公子韩奎，生动刻画了这一角色从纨绔子弟逐渐成长为优秀共产党地下工作者的心路历程。九月，他加盟郑晓龙导演执导的电视剧《金婚风雨情》，成功饰演了那位迂腐却又痴情一片的南方知识分子季诚，进一步证明了其驾驭不同时代背景人物的能力。 二零一零年，祖峰回归话剧领域，参演了剧目《四世同堂》。同年二月，他在电视剧《旗袍》中饰演了赵世杰，细腻演绎了该角色从投身革命的富家公子最终堕落为投敌叛变的阴险叛徒的复杂转变，并凭借此角色再次夺得二零一一年华鼎奖最佳男配角奖。八月，他在电影《建党伟业》中饰演了学生领袖邓中夏，再现了历史人物的风采。十月，他主演了孔笙执导的电影《天上的伙伴》，在片中饰演一位自闭症女孩陆小荷的父亲，以深沉而克制的表演展现了父爱的伟大。 二零一一年二月，祖峰再次与孔笙导演合作，参演电影《北川重生》。五月，他在话剧《爱情的印象》中迎来巨大挑战，一人分饰八个截然不同的角色，充分展现了其深厚的舞台功底和表演可塑性。六月，他主演电视剧《时尚女编辑》，饰演摄影师艾崇文。十二月，他参演娄烨执导的电影《浮城谜事》，饰演警察童明松，为其作品序列增添了又一风格化角色。 二零一二年五月，祖峰主演电视剧《独狼》，饰演了枪法精湛、有“枪王之王”之称的林杰森。同年十二月，他在电视剧《婚战》中饰演编辑孟三力，展现了都市人物的生活状态。二零一三年一月，他参演许鞍华执导的电影《黄金时代》，饰演东北作家罗烽。同年四月，他第三度与孔笙导演合作，在电视剧《北平无战事》中饰演崔中石，将一位外表温润优雅、内心坚定不畏生死的中共地下党员演绎得淋漓尽致，并因此获得二零一四年国剧盛典年度最佳男配角奖。八月，他参演电视剧《谋圣鬼谷子》，饰演姬元伯。九月，他出演张艺谋执导的电影《归来》，饰演反派邓指导一角。 二零一五年五月，祖峰参演电视剧《双刺》，出演外表冷酷内心温柔的暖男特工彭刚。同年，他还在电视剧《虎妈猫爸》中客串出演，饰演了胜男的同学。
二零一六年四月十八日，由祖峰参与演出的电视剧《欢乐颂》正式与观众见面，他在剧中精彩诠释了角色奇点，亦即魏渭。时隔一年，至二零一七年五月，祖峰再度出演电视剧《欢乐颂2》，并继续扮演奇点这一深入人心的角色。进入二零一八年，其演艺事业持续拓展，一月间有他参演的电影《无问西东》登陆院线；同年七月，另一部由他出演的电视剧《面具》播出，他在剧中成功塑造了军统潜伏特务李春秋这一复杂形象。 二零一九年对祖峰而言是意义非凡的一年。四月十八日，他首次执导的电影作品《六欲天》获得了国际影坛的认可，成功入围第七十二届戛纳电影节“一种关注”竞赛单元。随后在八月二十三日，他与周迅、吴镇宇共同领衔主演的电影《保持沉默》上映，祖峰在片中饰演了制作人田景程。九月二十六日，其自导自演的电影《六欲天》正式宣布定档于十一月一日在内地公映，相关的定档预告片及宣传海报也一并对外发布。同年十一月，他还出演了一部现实题材的电视剧《在不安的世界安静的活》。 二零二一年初，祖峰参演的脱贫攻坚主题剧《山海情》于一月十二日播出，他生动演绎了剧中人物白崇礼。五月四日，其出演的电视剧《理想照耀中国》与观众见面。七月一日，为庆祝重要历史时刻的电影《1921》上映，他在片中饰演了革命先辈董必武；紧接着在七月三十日，其参演的《盛夏未来》上映，他扮演了王叔叔一角。九月三十日，他又有新作电影《我和我的父辈》上映；十月十三日，一部汇聚了段奕宏、郝蕾、吴越、邢岷山等实力派演员的家庭悬疑网剧《八角亭谜雾》于爱奇艺迷雾剧场开播，祖峰亦在其中贡献了精湛演出。十二月二十日，他还参与了一档纪实类节目《凌晨零点零零后》的录制。 二零二二年伊始，祖峰主演的电影《家庭简史》于一月五日宣布开机；三月，其出演的冰球题材电影《父子雄冰》发布了首款概念版海报，引发关注。十月十二日，一部有他参与的纪录片《这十年幸福中国》在线上平台推出。年末的十二月十八日，他参演的项目《迷雾剧场》正式官宣了全新的演员阵容。 来到二零二三年，一月十六日，由祖峰领衔主演的电影《老枪》公布了主创阵容，他将在片中饰演顾学兵。四月十二日，一部为北京国际电影节特别打造的主题短片上线，其中亦有他的身影。十月十八日，他参演的悬疑剧集《仿生人间》播出。十一月二十一日，其主演的电视剧《欢迎来到麦乐村》与观众见面；同月二十五日，一部犯罪悬疑题材的电影《涉过愤怒的海》上映，祖峰参与了演出。十二月，他又投入了电视剧《黄雀》的拍摄工作。 二零二四年五月三日，祖峰主演的一部公益短片《大魔术师》在B站平台上线。次日五月四日，他参与了《第31届大学生电影节》的活动。五月九日，浙江卫视推出的“中国心”系列文化美育节目《金石中国心》第四集上线，祖峰作为嘉宾亮相。六月十六日，其参演的电影《阳光俱乐部》播出。十月二十五日，另一部有他出演的电影《老枪》登陆院线。而在十月十七日，由其主演的电影《得闲谨制》宣布顺利完成拍摄工作。年末的十二月二十五日，在“二零二四年腾讯娱乐年度盛典”上，祖峰凭借其出色的专业表现，荣获了“白皮书年度电影品质演员”这一重要荣誉。 二零二五年一月，祖峰的艺术探索延伸至舞台，其领衔主演的舞台剧《太白金星有点烦》于上海大剧院成功首演。三月十八日，他参演的电视剧《黄雀》播出。九月十二日，其出演的电影《家庭简史》上映。十月二十五日，由他主演的另一部电影《阳光俱乐部》与观众见面。十二月六日，他参演的电影《得闲谨制》也如期上映。 进入二零二六年，祖峰的演艺活动依然活跃，二月十七日，其参演的电影《星河入梦》正式上映，为其持续丰富的艺术履历再添一笔。
二零零零年，当时二十六岁的祖峰自北京电影学院顺利毕业并选择留校担任教职，正是在艺术院校之间频繁开展的学术交流活动里，他初次结识了同为戏剧教育工作者的刘天池。时光流转，四年之后的某一天，祖峰在一次友人组织的聚会上与刘天池再度相逢，两人在轻松融洽的氛围中展开了一番深入而愉快的交谈，彼此间的好感也由此悄然萌生。经过数年自然而从容的相处与了解，双方的感情日渐深厚，最终在二零一零年携手共赴婚姻的殿堂，结为人生伴侣。
祖峰在日常生活中有着丰富而雅致的个人爱好，他经常练习书法与篆刻，也乐于抄写经书、聆听戏曲以及阅读各类书籍。他一直保持着写信的传统习惯，早在大学求学期间，就坚持每周给父母撰写家书，向家人报平安并分享生活点滴。此外，他写给妻子刘天池的信件也积累了厚厚一叠，成为两人情感交流的珍贵记录。祖峰在书法和篆刻方面造诣颇深，其笔法沉稳有力，刀工细致传神，还曾受邀为电视剧《长安十二时辰》题写了片名及片头文字，展现出他在艺术领域的深厚功底。
祖峰的表演艺术往往以一种含蓄而深刻的方式展现光彩，他并不依赖夸张的肢体动作或强烈的语调变化，而是通过精准的眼神流转、细腻的身体语言以及诸多微妙的细节处理，共同构筑起人物独特的整体氛围，使得他所饰演的每一个角色都栩栩如生，仿佛具有真实的生命力。在电视剧《北平无战事》热播之后，祖峰所塑造的“崔中石”一角赢得了行业内外广泛而持久的赞誉。他成功为这个人物注入了温润如玉、沉稳内敛的独特气质，那种处变不惊、从容淡定的演绎，不仅深刻契合了角色的内在精髓，更以惊艳而富有层次的演出深深打动了广大观众，收获了无数由衷的喜爱与认可。
二零一六年五月八日凌晨，北京君为天美文化经纪有限公司通过其官方微博发布了一则正式声明，针对当时网络上出现的冒用演员祖峰名义发布微博、并就电视剧话题与网友展开讨论的行为进行澄清。声明中明确指出，祖峰本人并未在新浪微博或其他任何社交平台注册过个人账号，因此所有以“祖峰”名义发布的微博内容及相关言论均与祖峰本人无关，不能代表其个人观点。时隔多年，在二零二五年十一月十四日举办的金鸡奖提名表彰仪式及相关央视重播节目中，出现了一个引人关注的变化：此前凭借在作品《家庭简史》中饰演涂伟父亲一角而成功入围最佳男配角奖项的祖峰，其名字并未出现在最终的提名名单之中。截至目前，奖项主办方尚未就此次提名名单的调整对外作出公开说明或正式回应。